특허

본 발명은 복제 개의 생산방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 acteoside로 처리한 공여세포를 이용한 것을 특징으로 하는 복제 개의 생산방법 및 그에 따른 복제 개에 관한 것이다. 본 발명은 개과 동물로부터 공여세포를 분리배양하는 과정(1과정), 상기 공여세포에 대한 세포 배양 배지 처리하는 과정(2과정), 개과 동물의 수핵난자의 준비 과정(3과정), 체세포 복제견을 생산하는 과정을 수행하되(4과정), 상기 수핵난자의 난자 주위의 난구세포를 제거하는 과정(4-1과정), 상기 수핵난자들을 탈핵하는 과정(4-2과정), 상기 탈핵된 난자에 상기의 세포 배양 배지 처리된 공여세포를 주입하는 과정(4-3과정), 상기의 공여세포가 주입된 결합체 (couplets)를 융합 배지에 침전시키고, 바늘 형의 전극을 사용하여 전기 자극을 주어 난자 세포질과 세포를 융합시키는 과정(4-4과정), 상기 융합된 수정란을 돼지접합체배지 (PZM-3)에서 배양함으로써 활성화를 유도하는 과정(4-5과정), 상기 복제된 수정란을 세척한 후 PZM-3 내에서 추가로 배양하는 과정(4-6과정) 상기 배양된 체세포 복제란을 발정주기가 일치하는 대리모의 난관으로 수술적 방법으로 이용해 이식하는 과정(4-7과정), 을 포함하는 것을 특징으로 하는 복제개 생산 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 공여세포에 대한 세포 배양 배지 처리하는 과정(2과정)은 10% (v/v) FBS, 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 세포를 배양하는 과정, 또는 0.5% (v/v) FBS, 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 세포를 배양하는 과정, 또는 10% (v/v) FBS, 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 세포 배양하다가 acteoside를 배양 배지에 첨가하여 배양하는 과정인 것을 특징으로 하는 복제개 생산 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 개과 동물로부터 공여세포를 분리배양하는 과정(1과정)은 개과 동물의 태아를 제왕절개 방법으로 회수하는 과정(1-1과정), 회수된 태아는 실험실로 운반하여 머리와 사지를 제거하고 몸통만 PBS (Phosphate buffered saline)로 세척하는 과정(1-2과정), 상기 세척 후 남아있는 조직은 잘게 자르고 15% (v/v) FBS (invitrogen), 1% penicillin-streptomycin을 첨가한 DMEM에서 배양 접시에서 배양하는 과정(1-3과정), 상기 배양접시에 붙지 않은 조직은 제거하고 부착된 세포들을 컨플루언시(confluency)까지 배양하는 과정(1-4과정), 상기 배양된 세포를 트립신 처리하고 DMSO를 첨가한 FBS를 사용하여 액체 질소 내에서 동결 저장하는 과정(1-5과정) 을 포함하는 것을 특징으로 하는 복제개 생산 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 상기한 방법에 의하여 생산된 복제 개를 제공한다.